实验七附件-IC50测定实验流程实验讲义

ICs0测定实验流程一、抑制剂Y17991的配制1、取原药Y17991约2mg,根据相对分子质量加入Vo mL DMS0配置成50mM的母液A,涡旋震荡后待用，并在EP管盖上标明“Y1799150mM”计算公式为，=m=m实(mg)×纯度(%)MMxc其中m实为实际称量的原药Y17991质量(mg):M为原药Y17991的相对分子量：c为母液A的浓度50mM。2、取母液A20L,加入80LDMS0,配置成10mM测试液B50mL,涡旋震荡后待用，并在EP管盖上标明“Y1799110mM”,按图1所示依次稀释得到原药Y179911mM、100M、10M、1M。10mMY1799120L100MY1799120L1mMY1799110MY17991DMSO 180 HLDMSO 180 uL1mMY1799120L10MY1799120L1MY17991100MY17991DMSO 180 uLDMSO 180 uL图1依次稀释得到原药Y179911mM、100M、10M、1uM原药Y17991二、底物混合液的配制取一个15mL离心管，依次加入8mL磷酸缓冲液，2mL200mM琥珀酸，2mL530 uM DCIP和3.8mL超纯水，涡旋震荡后待用。如图2所示。