BIAcore生物分子相互作用分析仪原理和操作注意事项

BIAcore-生物分子相互作用分析仪原理和操作注意事项BIA(Biomolecular Interaction Analysis)提供了实时观察生物分子间相互作用的技术。通过它能观察两种分子结合的特异性，能知道两种分子的结合有多强，还能了解生物分子的结合过程共有多少个协同者和参与者。BIA可以让得到用其他技术方法难以得到的结果，因为它可以实时反映分子结合过程中每一秒变化的情况。无需借助标记物进行分析使BIA广泛应用于各类生物体系的测定，从各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸和寡聚糖直至类脂、噬菌体、病毒和细胞。BIA就是利用金属薄膜表面的折射率的改变，引起共振角的变化，来推断金属薄膜表面的变化。实验时先将一种生物分子固定在传感器芯片表面，将与之相互作用的分子溶于溶液流过芯片表面。检测器能跟踪检测溶液中的分子与芯片表面分子的结合、解离整个过程的变化。BIA技术是基于一种表面等离子共振(SPR)的物理光学现象的生物传感分析技术。不必使用荧光标记和同位素标记，从而保持了生物分子的天然活性。当入射光以临界角入射到两种不同透明介质的界面时将产生全反射，且反射光强度在各个角度上都应相同，但若在介质表面镀上一层金属薄膜后，由于入射光可以引起金属中自由电子的共振，从而导致反射光在一定的角度内大大减弱，其中使反射光完全消失的角度称为共振角。共振角会随金属薄膜表面通过的液相的折射率的改变而改变，折射率的变化(RU)又和结合在金属表面的大分子质量成正比。因此，BA技术可以通过对反应全过程中各种分子反射光的吸收获得初始的数据，并经相关处理获得结果一传感图。各种传感片的理化特性及用途传感器芯片是实时信号传导的载体。芯片结构是在玻璃片上覆盖了一层金膜，各种类型的芯片在金膜表面连有不同的多聚物以形成不同的表面环境，利于固定不同性质的生物分子。实验时先将一种生物分子固定在传感器芯片表面，将与之相互作用的分子溶于溶液流过芯片表面。检测器能跟踪检测溶液中的分子与芯片表面的分子结合、解离整个过程的变化。目前传感器芯片的种类有十余种。根据传感器芯片表面的物理化学特性适合耦联不同的蛋白质或其它生物大分子。