快速梯度PCR仪操作说明书手册

快速梯度PCR仪(1)连接电源，开PC仪器，大约3分钟后仪器达到稳定状态(2)仪器达到稳定状态后，仪器主界面：New Protocol/Protocol Auto Writer/Saved Files/Incubate Tools(a)New Protocol,编写新的PCR程序。Name给实验命名：olume PCR反应体系的体积：Lid盖子的温度，一般填写105℃。PCR程序设置：95℃热变性3~5分钟（面板DNA双链变为单链，有利于引物结合)：扩增程序95℃30秒，60℃（引物退火温度）30秒，延伸72℃时间依赖扩增片段长度进行设置，循环数35~45*：最后延伸72℃5~10分钟：全部PCR反应完成之后，温度保持在4~12℃。(b)Insert:插入实验步骤包括Temperature/Gradient/Goto,选择Temperature插入温度步骤，选择Gradient设置温度梯度，主要用于筛选引物退火温度（需设置最高和最低温度），选择Goto设置从那一步开始设置循环(c)Delete删除，选中实验步骤，点击Delete即可删除(d)Options选中一个实验步骤后，再点击“Options'”,即可对该实验步骤的参数进行修改(e)Save保存文件（实验），填写文件名、保存路径，点击“Save”即可()Run上述所有参数设置完成之后，点击“Run”,选择运行模块，可选择仅在A或B模块运行，或AB模块均运行此程序，点击“OK”即开始运行(g)Protocol AutoWriter::①Enzyme选择PCR反应所使用的酶，有iTag/iProof/Other三种：②Target填写扩增长度及引物退火温度，若在Enzyme中选择Oher,除上述2个参数外，还需要填写Gradient(温度梯度范围)/Hot Start Activation(热变性时间)/Final Extension(最后延伸时间)3个参数；③Speed PCR反应速度，Standard/Fast/Ultrafast3种可选h)Ta Calculation只知引物序列，不知退火温度可点击该图标，输入正向和反向引物序列，点击计算，可得出使用该对引物所使用的退火温度(①)点击“Nxt”,出现PCR反应程序，可对该程序进行编辑，包括插入、删除、参数修改等，方法同前面G)Save Files查看和调用已编辑好的PCR程序(k)Incubate恒温孵育，设置温度、时间及盖子温度，点击“Run”即可开始恒温孵育I)Tools PCR实验时辅助工具