细胞能量代谢仪操作手册

细胞能量代谢仪操作指南注意：使用前务必与负责人联系，否则后果自负。D11可以在网站上搜索相同细胞在其他文献中使用的接种密度以及进行的相关操作。提前一天晚上打开海马仪，并打开电脑的相关软件，保证右上边仪器状态为连接，同时温度为37℃，为第二天实验做准备。至少提前四个小时预热机器。http://www.agilent.com/cell-reference-database/2了解实验大致需要的接种密度之后，在第一次实验要尝试不同的接种密度。注意：有四个孔是系统默认的对照孔，不能接种细胞！A1、B4、C3、D6可以将这几个孔提前加入100uL的培养基以防忘记.3接种完的细胞皿放在超净工作台中，静置一个小时后再取出放入细胞培养箱，两到三个小时后待细胞贴壁后，每孔再加入150uL细胞培养基。注意：接种细胞的方法属于两步法，此方法能够最大程度地保证细胞贴壁的均一和稳定性。不同细胞贴壁快慢不同，因此在细胞培养箱中沉淀的时间也由1一6个小时不等。切记要补加培养基，不能忘掉。24W:2-step seeding100 uL of cells150 uL of medium1-5 hrs incubation4水化传感器。将配套的皿每个孔加入1mL的水化试剂，小心将传感器放上，注意传感器的位置一定不能有气泡，放上要通过振摇以及用针排气的方法，将气泡去除。放入37℃无二氧化碳的培养箱中，过夜水化。晚上要再检查一下看有没有新的气泡产生，注意排出气泡。5配置需要的基础培养液。每块板子需要的培养基约100mL,因此之后实验可以根据自己需要的培养基的量来配置。5.1有氧呼吸配置的培养基：(要根据细胞使用的培养基中的葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺含量来配置)加入一定量的葡萄糖、丙酮酸钠和谷氨酰胺后再用1N的氢氧化钠将pH调整到740。注意要在37℃的条件下调节pH值，同时，氢氧化钠的经验添加量是40一45uL。最后用FBase Medium将培养基体积调整至100mL.用微孔滤膜过滤培养基，备用。5.2无氧呼吸配置的培养基：