实验10-(1)Rev1

质粒DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳1实验目的掌握碱裂解法提取质粒的原理和方法，掌握琼脂糖凝胶电泳分离鉴定DNA的原理和方法。2实验原理2.1质粒质粒(plasmid)是在细菌中以独立于染色体之外的方式存在，是细菌染色体外的小型双链环状DNA复制子。质粒的大小不定，小的不到1kb,大的超过500kb,每个质粒都有一段DNA复制起始点的序列，它帮助质粒DNA在宿主细胞中复制。对细菌的某些代谢活动和耐药性表型具有一定的作用。目前，己发现有质粒的细菌有几百种，已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子（简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小，约为细菌染色体的0.5%~3%。根据相对分子质量的大小，大致上可以把质粒分成大小两类：较大一类的相对分子质量是40×10°以上，较小一类的相对分子质量是10×10°以下（少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细胞内只有1~2个质粒：另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后仍然能继续复制，每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关，某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型，而在变形杆菌内则属松弛型。在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体，如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tc和抗氨苄青霉素基因(Amp),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点，不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到HindⅢI、