单颗粒纳米生物检测仪简明操作规程

单颗粒纳米生物检测仪简明操作规程样品检测前准备：为了更好地实现样品检测，我们建议您在开机后准备样品的同时，准备下列物品：√150μL洗液和150 uL ddH20若干管，用于样品检测管路清洗和毛细管头清洁：√以下样品均用0.6mLEp管准备，实际样品体积不超过100L。●Sl6M-Exo(Silica Nanospheres Cocktail68-l55nm,I00 times dilution)用于EVs检测，如外泌体及其他折射率相近的纳米粒子●Counting standard beads(250 nm SiNPs,I00 times dilution)作为浓度标准品用于浓度定量。样品检测步骤（以外泌体检测为例）一、浓度标准品检测1.上样：Load浓度标准品(250 nm SiNPs,100μL),Sample-一一Boosting,时间1min。2.参数设置：在Samp.Inf中选择“250 nm Std FL SNPs”,默认参数为Laser power.20mW,SS Decay:0.2%。同时，输入稀释倍数100。样品名称可手动修改。3采样：Sample一一-Samping,点击工具栏图并选择Large signal,自动设置阀值：点击Auto Sampling并在Sampling SET右侧框中输入l.0,固定Sampling压力为l.0kPa:等待Sampling压力稳定在l.0kPa后，点击Time to Record采集数据：数据采集完成后采集模式自动跳到Buffer,点击弹框中的Save按钮，保存数据为Nfa File;将样品Unload。4.毛细管清洗：Load洗液(150μL),Sample-一一Boosting时间1min,Unload。用超纯水(150μL)清除毛细管头残留的洗液。二、粒径标准品检测1.上样：Load粒径标准品(Silica Nanospheres68-155m,l00μL),SampleBoosting,时间1min.2.参数设置：在Samp.Inf中选择“68-155S16M-Ex0”。样品名称可手动修改。3.采样：Sample Sampling,点击工具栏图并选择Small signal,自动设置阀值：固定Sampling压力l.0kPa:点击Time to Record采集数据：点击弹框中的Save按钮，保存数据为Nfa File:将样品Unload。4.毛细管清洗：Load洗液(l50μL),Sample一一Boosting时间1min,Unload。用超纯水(150μL)清除毛细管头残留的洗液。三、空白对照检测：参照步骤二。四、样品检测：参照步骤二。浓度检测·稀释浓度标准品和样品使检测粒子数在4000-8000 particles/min(最佳范围)，最高颗粒数不要超过12000 particles/min。250 nm SiNPs浓度标准品建议稀释100倍粒径检测粒径标准品、空白对照和待测样品均需要在相同激光功率和散射通道衰减系数下采样●若待测样品粒径偏小，需要提高激光功率，则68-155m粒径标准品和空白对照也在修改后的条件下进行检测荧光样品检测（去除游离的染料分子*)1.确认选用的荧光染料的激发光谱和发射光谱与仪器相匹配。2.根据“检测条件设置”设定初始检测条件，再根据各个通道的信号强度调整激光检测参数使荧光通道的信号能与背景良好区分，且散射通道的信号不饱和，即提高激光功率，增大散射通道信号衰减倍数3.去除游离的染料或优化抗体标记量●免疫荧光染色时，请确认游离的抗体已被除去或者优化抗体标记量使荧光背景水平降低到合适的水平：●做磷脂染色时，要注意磷脂分子自身团聚的问题：1/13